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一、产品参数理解相关疑问
Q1：冻干探针管上标注的“2OD”是什么意思？如何快速换算成质量浓度？
A：①“2OD”是核酸类探针合成时的光密度值，为定量单位而非质量单位。（OD即光密度，1OD≈40μg/mLdsDNA），
②示例：若标注为”To100μM，加50μL，总质量100μg，WM：8000″
稀释到25μM：需加4×50μL=200μL溶剂
质量浓度：(100μg×1000ng/μg)÷200μL=500ng/μL
Q2：探针管上标注的“WM（分子量）”有什么实际用途？实验中需要用到这个数值吗？
A：分子量是合成过程中计算“特定浓度所需溶剂体积”的核心依据，客户无需单独使用该数值，直接按标注的“To[目标浓度]μM，加[Xμl]”操作即可，无需自行二次计算。
二、稀释操作相关疑问
Q3：探针稀释用无菌水还是TE缓冲液？两者对实验结果有影响吗？
A：两者均可，但各有侧重：
无菌水：适合立即使用的探针（短期内使用完，如1周内使用）
TE缓冲液（pH8.0）：含Tris和EDTA，能稳定pH并螯合Mg2+，显著延长探针稳定性，适合长期分装保存。
推荐方案：优先使用TE缓冲液，尤其是需多次使用的探针。
注意：TE缓冲液需用DEPC水配制，避免RNase污染。
Q4：稀释时加错了溶剂体积（比如多加/少加），能补救吗？
A：①少加溶剂（浓度偏高）：可根据“C1V1=C2V2”补加溶剂
例如：应加200μL溶剂（目标25μM），实际加了150μL，需补加溶剂体积=（25×200-25×150）/25=50μL（补加后总体积200μL，浓度恢复25μM）；
②多加溶剂（浓度偏低）：无法补救，因探针总质量固定，多加的溶剂会稀释总浓度，且无法分离多余溶剂，需重新合成探针或使用备用分装液重新稀释。
Q5：稀释探针时，溶剂加完后需要怎么处理？是否需要离心或剧烈震荡？
A：①加完溶剂后，轻轻颠倒离心管数次混匀即可，禁止剧烈震荡（避免破坏探针的核酸链结构和荧光基团）；
②无需额外离心，若探针未完全溶解，可在室温避光静置5–10分钟，再轻轻颠倒混匀，直至完全溶解（冻干探针溶解需要一定时间）。
三、浓度换算相关疑问
Q6：如何将25μM的存储液稀释到FISH试剂盒要求的10~15ng/μL工作浓度？
A：换算公式:
质量浓度（ng/μL）=摩尔浓度（μM）×分子量（Da）×10-3
示例：探针分子量WM=8000Da，说明书标注稀释为25μM
存储液浓度=25×8000÷1000=200ng/μL
试剂盒要求10~15ng/μL，WM=8000Da
10ng/μL对应的摩尔浓度=10×1000÷8000=1.25μM
15ng/μL对应的摩尔浓度=15×1000÷8000=1.875μM
您需要将25μM的存储液稀释13~20倍（25÷1.25=20，25÷1.875≈13）
四、保存条件相关疑问
Q7：探针稀释后分装，每次取用时如何防止反复冻融和荧光淬灭？
A：反复冻融是导致探针降解和信号衰减的首要原因，分装操作建议：
1.首次稀释：按4X体积稀释至25μM后，立即分装为5-10μL/管（单次用量）；
2.保存：分装后用锡纸包裹离心管，-20℃避光，避免放入自动除霜冰箱的冷冻层；
3.取用：每次取1管，4℃避光当天用完，尽量当日使用完；若单管未用完，用铝箔严密包裹后放4℃，24h内用完，严禁二次冻存。
Q8:为什么推荐将探针稀释到25μM作为存储浓度，而不是直接用100μM存储或使用？
A：25μM是兼顾“稳定性”和“使用便利性”的最优存储浓度，在-20℃（短期）或-80℃（长期）保存时，可显著延长探针的活性有效期。100μM浓度过高长期冻存容易发生分子间聚集甚至微量沉淀，导致有效浓度下降。
