土壤的采集保存方法

1 样品的采集

采样土壤样品需要准备的物品:取样铲，土钻，钢尺，卷尺，记号笔，中性笔，记录本，灭菌自封袋，灭菌牛皮纸，灭菌的螺口管、干冰（储能冰袋或冰袋），塑料泡沫盒，胶带。

为了充分反映实验区的土壤情况，在采集土壤样本时，至少需要3个重复， 即在实验区的3个地点分别取样，3个地点之间需要保持一定距离。为了避免空气中微生物的污染，一般采集土壤表层 5-20cm 处土壤样品。具体的取样深度需 根据实验目的进行选择确定。在取样前，需要先用取样铲将土壤表层的浮土和杂草去除。如果土样较深，可采用土钻对土壤样品进行采集。将采集好的土壤样本过 2mm 的土壤筛，出去土壤中细根、石子、虫子等杂物。若土壤样本粘性较大， 可用镊子去除样本中的杂物。将采集好的土壤样本，放入准备好的无菌的自封袋、牛皮纸或螺口管等。写好编号，做好记录。每个样本需提供 1-2g 土壤样 本。

为了防止微生物死亡或者 DNA 降解，采样后建议立即冰冻保存。有条件的，可以将样品放入带有干冰的泡沫盒中保存，若没有干冰，可以用冰袋代替。之后迅速运回实验室，放入-80℃进行保存。

如果无法实现干冰、-80℃等低温条件，可采用微基生物研发的土壤微生物常温保存套装（样本保存液和采样耗材），可以实现土壤样本微生物DNA的常温保存和运输。

2 样本的保存和寄送

若在样本采集现场无法实现对样本中杂物的去除工作，回到实验室后，尽快将土壤样品中的石头、植物根系、虫子等剔除，然后将土样放入-80℃冰箱中进行储存。如果实验室中没有-80℃的冰箱，可以将样品放到-20℃冰箱短期（1 个 月内）保存。在保存期间，避免反复冻融。

为了真实的反应土壤中微生物多样性，取样后，应尽快送到公司进行检测。 通过查阅相关文献发现，土壤样品采集后放入-20℃冰箱低温冻存 4 个月，土壤微生物群落的多样性大大降低。

送样时请尽量使用冰盒（泡沫盒+干冰+冰袋），以保证运输过程中的低温条件（干冰的挥发消耗量约为 3 公斤/天）。在打包时先放入足量的干冰，之后用冰袋填充泡沫盒中间的空隙。为了保持较好的低温效果，建议采用厚一点的泡沫盒。

 参考文献

（1） Wang N, Zhang T, Zhang F, et al. Diversity and structure of soil bacterial communities in the Fildes Region (maritime Antarctica) as revealed by 454 pyrosequencing. Frontiers in Microbiology, 2015 (6): 1-11.

（2）Liang Y, Jiang Y, Wang F, et al. Long-term soil transplant simulating
climate change with latitude significantly alters microbial temporal turnover. The ISME Journal, 2015, 9: 2516-2572.

（3）周杨，崔航，朱红惠，等. 土壤样品长期保存对微生物群落代谢活性和功能类群的影响. 微生物学通报，2015，42（6）：1017-1024.