CRISPR-Cas 靶向基因编辑服务

简介

CRISPR-Cas技术在微生物研究中有极为广泛的应用，主要范围包括重要功能基因改造、基因表达控制、代谢工程研究、合成生物学等，为科研和生物技术应用提供了简单、有效的操作工具。我们提供微生物基因组改造服务，可针对不同的菌株，利用CRISPR-Cas9或Cas12a技术实现无痕的靶向基因敲除、突变和敲入。目前这两项编辑技术都表现出各自的优势和局限性，因此我们会根据客户的需求，个性化制定双质粒CRISPR-Cas9或CRISPR-Cas12a实验，为您提供高效及精准的一体化微生物基因编辑服务。

 

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技术路线

文献解读

标题：5‐Aminolevulinic acid production from inexpensive glucose by engineering the C4 pathway in Escherichia coli

通过改造大肠杆菌的碳4路径以葡萄糖为来源提高5-氨基乙酰丙酸的产量

期刊名称：Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology

发表时间：2017年8月

主要内容

本研究利用双质粒CRISPR-Cas9系统，在大肠杆菌中敲除sucCD 基因并敲入红细菌的hemA基因。通过靶向基因编辑，显著提高了5-氨基乙酰丙酸（ALA）在大肠杆菌中的产量。ALA是四吡咯化合物天然生物合成路线中第一个合成中间体，由于其广泛的潜在应用，引起了广泛的关注。

ALA在不同重组大肠杆菌中的浓度比对。M3为对照组，改造菌株的ALA产量均有不同程度的提高。

 

原文链接：https://academic.oup.com/jimb/article/44/8/1127/6014985 

 

标题：CRISPR-Cas12a-Assisted Recombineering in Bacteria

期刊名称：Applied and Environmental Microbiology (ASM Journal)

发表时间：2017.06

主要内容

簇状规则间隔短回文重复序列(CRISPR)-Cas12a(Cpf1)已经成为许多生物中有效的基因组编辑工具。在这里，本研究开发并优化了一个CRISPR-Cas12a辅助的细菌基因编辑技术。使用这个系统可以有效的实现对大肠杆菌、鼠疫杆菌和分枝杆菌的基因敲除和敲入。优化的CRISPR-Cas12a 技术不需要引入将抗生素基因来筛选重组菌株，因此这是一种有效的方法，可以产生无标记和无瘢痕的重组细菌。

pMT是天然存在于鼠疫耶尔森氏菌中的一种质粒，利用CRISPR-Cas12a技术可以在该质粒中产生caf1R突变。本实验将四个精氨酸密码子突变为丙氨酸密码子，最高编辑效率达到90%。

  

原文链接：https://journals.asm.org/doi/10.1128/AEM.00947-17