服务简介   

多重荧光定量PCR(Multiple fluorescencequantitative PCR)技术是在荧光定量PCR技术的基础上，利用几种不同荧光基团的组合，结合仪器对不同通道荧光的检测能力实现对多个靶标的实时定量检测。引物和探针的特异性是多重qPCR实验的关键。

微基生物为客户提供高质量的多重qPCR引物、探针对设计服务。针对多个目标菌株或微生物种类，设计多重qPCR引物和探针组合，实现同时检测多个目标微生物，提高检测效率和准确性。

服务亮点

高效检测：能够同时检测多个靶标，有效节省时间和成本。

准确定量：高特异性和灵敏度，确保检测结果的准确性。

定制化服务：根据客户需求设计个性化的引物/探针对组合。

全流程服务：从设计到验证的全流程服务，助力实验顺利进行。

服务流程 

1.目标基因序列分析

收集并分析目标微生物或基因的序列信息，确定保守区域。

2.引物和探针设计

根据保守区域设计特异性引物和探针，确保相同反应条件下具有良好的扩增效率和特异性。

3.实验验证

实验验证引物和探针的扩增效率和特异性，优化反应条件，确保检测结果的可靠性。

4.结果分析与报告

对检测结果进行分析，提供详细分析报告。

客户提供信息 

提供多个目标微生物或基因的相关信息，包括物种名称、基因名称等。

案例分享 

Multiplex TaqMan qPCR Assay for Detection, Identification, and Quantification of Three Sclerotinia Species.2022

开发一种能够同时检测、鉴定和定量三种核盘菌的多重TaqMan qPCR检测方法。该方法通过设计针对每种核盘菌的特异性TaqMan引物/探针组合，实现了这三种真菌的高效检测。

样本类型：菌核样本、土壤样本以及纯培养物。

研究结果

1. 该方法实现了三种核盘菌的高效检测，具有高特异性和灵敏度。

2. 适用于不同类型的样本检测，为核盘菌病害的早期诊断和防控提供了有力工具。

用于检测核盘菌属物种的 TaqMan 检测引物和探针的设计

单重和多重TaqMan qPCR检测核盘菌的特异性

多重qPCR检测的标准曲线

微基生物团队拥有丰富的多重qPCR设计和优化经验，提供多重qPCR引物/探针对设计的全流程服务，全方位的技术支持，确保您实验的顺利进行。

多重qPCR引物/探针对设计，首发于微基生物。

服务亮点

精准富集与检测：结合超多重 PCR 扩增或靶向捕获技术与高通量测序，精准富集目标微生物基因序列，实现高效精准检测。

高灵敏度与特异性：靶向检测特定微生物特定基因，通过多重PCR扩增富集核酸序列提高检测灵敏度，特异性探针/引物设计减少非目标序列干扰，保证准确性。

全面覆盖与多重检测：能同时检测多种微生物，涵盖细菌、病毒、真菌、寄生虫等类型，全面分析复杂微生物群落。

广泛适用与定制：适用于多种微生物检测需求，包括环境微生物监测、临床样本病原微生物检测等，可根据需求定制探针/引物和检测方案。

检测原理

tNGS（靶向测序）结合超多重PCR扩增或靶向捕获技术与高通量测序。

引物设计与多重PCR扩增：根据特定微生物菌群的基因组信息，利用生物信息学工具设计特异性探针/引物。通过多重PCR技术同时扩增多个目标基因片段，富集微生物核酸序列。

高通量测序与生物信息学分析：对扩增得到的DNA片段进行高通量测序，结合生物信息学分析比对数据库，鉴定微生物种类及其基因特征，实现精准检测与分析。

样本类型

临床样本：血液、鼻/咽拭子、痰液、尿液、粪便、脑脊液、穿刺液等。

环境样本：土壤、水体、空气、食品等。

其他生物样本：动植物组织

微基生物深耕微生物检测领域多年，在目标微生物的探针/引物设计方面积累了深厚的经验。公司拥有成熟完善的服务流程及先进的设计平台，能够依据项目的独特需求，设计出与目标微生物高度匹配的探针/引物。

特定微生物菌群超多重tNGS设计检测，首发于微基生物。

服务简介 

针对特定微生物菌株定量检测，微基生物提供基于全基因组序列的菌株特异性TaqMan探针/引物设计、合成及验证服务，确保探针/引物的高特异性和扩增效率，满足复杂微生物群落背景下的单菌株检测需求。

服务亮点 

1.高特异性与灵敏度

全基因组比对和优化设计，确保引物/探针仅与目标序列高度匹配，避免非特异性扩增。

2.灵活的检测方法

提供qPCR探针法和液滴数字PCR（ddPCR）技术方案，满足不同样本类型和研究需求。

3.全流程服务

数据库构建到引物/探针设计、验证与优化，再到大规模检测，一站式解决实验需求。

4.可靠的数据支持

严格的质量控制和优化流程，确保实验结果的准确性和可重复性。

服务流程 

1.数据库构建

通过查询菌株的序列信息，构建该菌株的全基因组数据库。

2.特异性引物/探针设计

利用生物信息学工具，设计针对目标菌株的特异性引物或探针。

3.验证及优化

合成设计好的引物，并进行特异性、扩增效率等验证和优化。

4.大规模检测

使用验证通过的引物进行菌株特异性进行大规模检测。

检测方法 

1.TaqMan qPCR探针法

利用与目标菌株核酸序列特异性结合的探针，提高检测灵敏度和特异性。

验证方法：通过分析特异性、灵敏度和重复性来验证引物和探针。使用已知含目标菌株DNA的样本检测特异性；稀释目标DNA模板测灵敏度；重复实验计算Ct值和标准差评估重复性。

3.ddPCR定量检测

将反应体系分割成大量纳升液滴，每个液滴独立进行PCR反应，通过阳性和阴性液滴数量比计算目标核酸绝对拷贝数。

验证方法：通过与传统培养法或qPCR法比较验证ddPCR引物和探针。将ddPCR结果与培养法计数结果比较，评估准确性；与qPCR法比较，分析相关性和一致性，同时分析重复实验液滴数量分布和标准差评估重复性。

客户提供信息 

提供该菌株的拉丁文全名。提供菌株的测序结果（建议提供全序列而非16S全长序列）。

案例分享 

案例1：艰难梭菌毒素基因的绝对定量检测（Establishment and application of absolute quantitative PCR method for tedA and tcdB genes of Clostridioides difficile.2025）

通过对产毒性艰难梭菌的tedA和tcdB基因进行特异性引物和探针设计，结合qPCR技术，实现对产毒性艰难梭菌的高灵敏度和特异性的定量检测。该方法具有线性范围广、灵敏性高、特异性和可重复性良好等特点。

案例2：ddPCR系统在病原微生物检测中的应用（Qualitative and quantitative detection of surgical pathogenic microorganisms Escherichia coli and Staphylococcus aureus based on ddPCR system.2021）

利用微滴数字PCR（ddPCR）系统对外科病原微生物大肠杆菌和金黄色葡萄球菌进行定性和定量检测。通过设计针对特定基因的引物和探针，结合ddPCR技术实现高精度定量检测。研究证明ddPCR系统在血液样本中具有极高的检测准确性。

ddPCR系统同时检测模拟细菌血样(大肠杆菌ATCC25922和金黄色葡萄球菌ATCC25923)的定量结果。

菌株特异性TaqMan探针/引物设计及验证是微生物检测与定量研究的关键，qPCR探针法、ddPCR技术各有特点，适用于不同场景下的菌株检测与定量分析。

菌株特异性TaqMan探针/引物设计，首发于微基生物。

在微生物组学研究中，准确检测和定量分析目标菌属或菌种是揭示微生物群落功能机制的关键。微基生物依托先进的生物信息学技术和丰富的实验经验，提供基于全基因组序列的菌种/属特异性TaqMan探针/引物设计、合成及验证服务。从而实现在复杂的微生物群落背景下实现单菌种级别的绝对定量。

服务亮点 

1.高特异性与灵敏度

全基因组比对和优化设计，确保探针/引物仅与目标序列高度匹配，避免非特异性扩增。

2.灵活的检测方法

提供qPCR探针法和液滴数字PCR（ddPCR）等检测方法，满足不同样本类型和研究需求。

3.全流程服务

数据库构建到探针/引物设计、验证与优化，再到大规模检测，一站式解决实验需求。

4.可靠的数据支持

严格的质量控制和优化流程，确保实验结果的准确性和可重复性。

服务流程 

1.数据库构建

查询菌种/属的序列信息，构建全基因组数据库。

2.引物/探针设计

利用生物信息学工具，设计特异性引物或探针。

3.验证与优化

合成设计好的引物或探针，并进行特异性、扩增效率等验证和优化。

4.大规模检测

使用验证通过的引物或探针对目标菌种/属进行大规模检测。

qPCR TaqMan探针检测方法 

微基生物提供基于TaqMan探针的qPCR探针/引物设计服务。确保探针与目标序列特异性结合，通过Taq酶水解探针产生可检测的荧光信号。优化Tm值和长度，提高扩增效率和特异性。                           

qPCR TaqMan探针法

液滴数字PCR（ddPCR）法

微基生物提供基于液滴数字PCR（ddPCR）的探针/引物设计服务。无需标准曲线，直接对目标菌种进行绝对定量分析。特别适用于临床样本、环境样本及低丰度菌种的检测。

客户提供信息 

目标菌种/属的拉丁文全名。

目标菌种的全基因组序列或靶标基因序列。

案例分享 

Detecting and quantifying Veillonella by real-time quantitative PCR and droplet digital PCR.（2024年）

针对维洛内拉菌（Veillonella）低丰度样本的检测需求，设计特异性引物和探针，评估qPCR和ddPCR方法的特异性和敏感性。

研究方法

1.基于16S rRNA基因序列设计引物和探针，进行qPCR和ddPCR检测。

2.使用模拟临床样本测试两种方法的特异性和灵敏度。

3.收集炎症性肠病（IBD）患者的临床样本，验证检测系统的有效性。

研究结果

1.qPCR的检测灵敏度100拷贝/μL，能够准确检测10³到10⁸CFU/mL的Veillonella浓度。

2.ddPCR的检测灵敏度为11.3拷贝/μL，适合检测10¹到10⁴CFU/mL的低丰度样本。

3.临床样本中，qPCR和ddPCR的检测结果与平板计数法一致，验证了检测系统的准确性。

4.通过ddPCR检测到的Veillonella种类包括V.dispar、V.nakazawae和V.rodentium。      

qPCR检测的灵敏度和特异性结果 

 ddPCR检测的灵敏度和特异性结果

qPCR和ddPCR均适用于检测和定量维洛内拉菌，其中qPCR更适合检测较高丰度的样本，而ddPCR更适合检测低丰度的样本。

微基生物致力于为微生物研究提供全面、高效的解决方案。选择菌种/属特异性TaqMan探针/引物设计与检测服务，让您的实验更高效、更可靠！

菌种/属特异性TaqMan探针/引物设计，首发于微基生物。

海量现货直供，快速响应专属检测需求

产品核心优势

极速交付：任一菌种，18工作日内交付

全套试剂，开盒即用：菌种特异TaqMan qPCR，绝对定量

免费升级，自带内参：双定量，同步实现全部16S绝对定量

可升级为ddPCR检测：高宿主DNA污染、极低丰度菌种检测

支持qPCR-FISH双模联检方案定制

常见微生物菌种检测需求，95% 均可满足，现货15个工作日交付；

目录外菌种定制开发，最迟5周完成。

菌种特异性qPCR探针检测试剂盒 部分产品展示

上述覆盖率涉及的靶基因，已排除过非目标菌的非特异性扩增。

高效交付与质量保障体系

1 全面详实的评估报告

菌种内全部已知菌株的覆盖率百分比：全面分析特定菌种下GeneBank中已知菌株全基因组序列，锁定高覆盖率基因，确保对目标菌种内全部菌株的高覆盖率。

对所有非目标微生物的非特异性检出评估结果：调取GeneBank中全部已知非目标微生物序列，评估候选探针、引物的非特异性反应，筛选出具有高特异性的探针和引物。

2 卓越检测性能与便捷操作

高灵敏度：检测限低至20拷贝/反应（qPCR）或单拷贝（dPCR），检测低含量目标微生物。

多重检测：探针法qPCR支持多重qPCR/dPCR检测，支持同一反应体系内同时检测2-4种菌种，大大提高实验效率，节省时间与成本。

即用型预混配方：含DNA聚合酶、dNTP、UNG酶等成分，简化实验流程，减少误差。

dUTP/UNG防污染系统：降低PCR产物气溶胶污染，极大程度上防止假阳性结果的出现。

提供阳性/阴性对照（1×10⁷拷贝/μL）：有效区分假阴性与假阳性，保障结果可信度。

3 全流程方法学验证

通过qPCR条件优化、线性范围、灵敏度、抗干扰性等全流程验证，qPCR定量线性范围达5个数量级，确保试剂盒性能卓越可靠。

真实科研案例，见证卓越效果

使用格微@菌种特异性qPCR探针试剂盒对样本进行检测，以2*10⁶copies-2*10¹copies/反应的质粒为模板展示了不同荧光信号（FAM、HEX、ROX、CY5）在TE背景和人基因组DNA背景下的检测结果，具体如下：

总体扩增情况：从总体扩增图来看，各荧光信号对应的曲线呈现明显的S型扩增曲线，表明在反应体系中模板DNA得到了有效的扩增。试剂盒具有较好的稳定性和可靠性。

不同背景下CT值：在TE背景和人的基因组DNA背景下，针对A、B、C、D菌，四种荧光信号的标准曲线均呈现良好线性，扩增效率在90%-110%之间，线性关系在0.999。试剂盒在复杂背景中可特异性检测目标微生物DNA，具有高准确性、特异性和抗干扰能力。

极速交付：格微®菌种特异性qPCR探针检测试剂盒，首发于微基生物。