微基生物 » 低偏差扩增建库 http://www.tinygene.com 您自己的微生态研究团队|专注微生态研究与应用 Tue, 31 Mar 2026 06:24:06 +0000 zh-CN hourly 1 https://wordpress.org/?v=4.2.29 低偏差扩增建库 http://www.tinygene.com/lea-seq/lea-pcr http://www.tinygene.com/lea-seq/lea-pcr#comments Mon, 25 Aug 2014 06:16:23 +0000 http://tinygenetest.gotoip2.com./?p=228 采用二代测序（Next Generation Sequencing，NGS）进行微生物多样性研究，文库制备至关 …

低偏差扩增建库，首发于微基生物。

]]> 采用二代测序（Next Generation Sequencing，NGS）进行微生物多样性研究，文库制备至关重要。在高通量测序过程中，文库构建需要PCR扩增对原始样本序列进行指数放大，而在此过程中产生的差异也是必不可免的，他决定了样本中微量或是痕量微生物是否被检测，测序结果是否能真实地反应样本中微生物的存在情况。较传统PCR扩增不同，微基生物采用顶级期刊science发表的文章中低偏差扩增测序（Low Error Amplicon Sequencing，LEA-Seq）方法，这种建库方法更真实的反应环境中微生物的存在。

LEA-Seq扩增原理：特异引物融合测序引物和二代测序仪器所必须的adaptor后是一条长度将近100bp的引物，引物过长PCR扩增效果会相对降低。所以LEA-Seq方法是将引物设计成两条相对较短的引物，分别包括正向内侧引物，正向外侧引物，反向内侧引物，反向外侧引物。首先利用低浓度的正向内侧引物，对目的片段进行少数循环的线性扩增，随后加入正向外侧引物、反向内侧引物及反向外侧引物进行目的片的指数扩增，详细描述可参见参考文献。

 

LEA-PCR

参考文献：The Long-Term Stability of the Human Gut Microbiota. Science

低偏差扩增建库，首发于微基生物。

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